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【生物】为什么细胞内 DNA 复制的引物是 RNA ,而 PCR 的引物是 DNA ?


【生物】为什么细胞内 DNA 复制的引物是 RNA ,而 PCR 的引物是 DNA ?

  细胞内 DNA 分子复制过程可概括为:① 双链的解开 ② RNA 引物的合成 ③ DNA 链的延伸 ④ 切除 RNA 引物 ⑤ 填补缺口并连接相邻的 DNA 片段。迄今为止,无论是在原核生物还是在真核生物中所发现的 DNA 聚合酶,都必须有模板链和 3'–OH 末端的引物链存在,才能合成新的 DNA 链(由 5'→3' 方向延伸)。这就需要在 DNA 复制起始阶段由 RNA 聚合酶首先合成一小段 RNA 作为引物,RNA 引物就提供了这个羟基,DNA 聚合酶 Ⅲ 才会真正开始 DNA 链的合成。

  在细胞中,只有 RNA 聚合酶可以从头合成 RNA,合成的 RNA 与模板链结合,从而引导 DNA 分子子链的延伸。而 DNA 聚合酶由于它的保真系统决定它不能从头合成 DNA 单链,所以 DNA 复制时先由 RNA 聚合酶合成一段 RNA 链,再由 DNA 聚合酶起到 DNA 分子复制时的延伸功能,形成互补的子链。

  再从 DNA 分子复制的忠实性看,一般 DNA 分子两端的碱基对不稳定,因此在合成起始段时,开头的几个碱基如果发生差错将不易矫正。为了保证产生高保真的 DNA 分子就得先延长一个要丢弃的引物,使新加上的碱基严格按照碱基互补配对,进行准确复制,以保证复制的忠实性,即中途配对有差错也会通过酶自动修复。另外,使用 RNA 作为合成 DNA 的引物,主要在于它易被 DNA 聚合酶 Ⅲ 作为 DNA 合成终止的信号识别,使 DNA 聚合酶 Ⅰ 进行切口移位,以减少 DNA 复制的出错率。如果用 DNA 单链作为引物,则不能被 DNA 聚合酶 Ⅲ 识别,因为 DNA、RNA 的化学组成不同,从而影响了 DNA 分子的复制。这是 DNA 分子复制以 RNA 为引物的主要原因。

  在 PCR 仪中用的是 DNA 引物,是人工设计合成的,一般不用 RNA 作为引物。因为 RNA 引物需要被切除,而 PCR 仪中没有这种酶;再者,RNA 引物被切除后将使这个新合成的 DNA 的两端都出现一段单链而不稳定。


文章作者: q779
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