【生物】基因工程中单酶切和双酶切哪个更好？

  在进行单酶切时，得到的目的基因与质粒两头的黏性末端是相同的。由于在进行连接反应时，目的基因和载体是随机碰撞的，且两者的黏性末端都相同。所以，目的基因既可以与质粒正向连接（正连），即目的基因顺时针地按其上游到下游的方向与载体相连，也可以与质粒反向连接（反连）。

  为了防止出现反连现象，实验中常采用双酶切的方法。双酶切即采用两种不同的限制酶同时处理目的基因和质粒。因为限制酶具有特异性，不同的酶一般作用于不同的碱基序列，所以得到的黏性末端也是不同的。这样当应用 DNA 连接酶进行连接时，就只能存在一种正连情况，而不会出现反连的现象。正因为可以有效地防止错误连接的现象出现，双酶切的做法被广泛应用于基因工程中表达载体的构建。