【生物】植物体细胞杂交如何筛选出杂种细胞?
原生质体间的融合是随机的,两个不同亲本的原生质体混合后经诱导融合,实际上得到的是各种原生质体的混合物,包括异核体(AB 型)、同核体(AA 型和 BB 型)以及未发生融合的双亲原生质体(A 和 B)。而植物体细胞杂交的目的是要突破不同种属的植物远缘杂交不亲和的障碍,获得具有双亲遗传特性的新的植物类型。因此需要通过筛选获得异核体,即杂种细胞。
筛选杂种细胞的常用方法有
互补选择法
这种方法的原理是利用现成的或诱发产生的各种缺陷型或抗性型的突变体细胞作为融合实验的材料。由于突变体均不能在特定的选择性培养基上生长,而能在该培养基上正常生长的是互补的杂种细胞,因此可将其筛选出来。
机械选择法
利用两种原生质体的某些可见标志(如形态、颜色等差异),对融合产物进行鉴别,筛选出杂种细胞进行单独培养。对于在形态、颜色上难以区分的原生质体融合形成的异核体,可利用不同荧光素分别标记亮亲本的原生质体,然后进行诱导融合,在荧光显微镜下选择同时带有两种荧光标记的杂种细胞。
组织培养筛选法
将“植物细胞对培养基成分和培养条件的要求与反应不同”作为选择杂种细胞的依据,利用这种特性或人为地造成杂种细胞生长和分化能力的差异来进行杂种细胞的选择。