【生物】单抗制备过程为何进行两次专一抗体检测？

  单抗制备过程中，从免疫小鼠的脾中获得的脾细胞包含多种 B 细胞，他们产生的是不同的抗体。为了得到目标抗体，必然要进行检测，这就是“专一抗体检测”，这里是第一次。

  在筛选过程中用的是多孔细胞培养板，每个孔中的杂交瘤细胞不止一个，因此阳性孔中的细胞除了含有分泌需要的特异性抗体的细胞外，还可能含有分泌其他抗体的细胞，也可能含有不分泌抗体的细胞，所以不能直接把阳性孔的细胞用以生产单克隆抗体。必须要进行第二次筛选（第一次是筛选杂交瘤细胞），这个步骤被称为“杂交瘤细胞的克隆化”，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。接下来就要进行第二次“专一抗体检测”。检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行 3~4 次，直至确信每个孔中增殖的细胞均为单克隆细胞。