【生物】血细胞计数板及其计数方法
血细胞计数板上有两个方格网(图 1),每个方格网刻有 9 个大方格,其中中央的一个大方格为计数室(图 2)。计数室的面积为 $1 \mathrm{~mm}^2$,其两侧各有一条高出计数室平面 $0.1 \mathrm{~mm}$ 的结构。加盖玻片后,盖玻片与计数室之间形成 $0.1 \mathrm{~mm}$ 的缝隙,因此,计数室的容积为 $0.1 \mathrm{~mm}^3\left(10^{-4} \mathrm{~mL}\right)$。计数室通常有两种规格:16 个中方格 × 25 个小方格 和 25 个中方格 × 16 个小方格(图 3),两种规格的计数室均被划分为 400 个小方格。
计数方法(以 25×16 型为例):
可用五点取样法统计(图3)5 个中方格中的总菌数,结合以下公式计算
计数同一样品时,可对同一计数板上 2 个计数室计数,再取平均值。
被台盼蓝染色的细胞(即死细胞)不计数。注意染色液体对稀释程度的影响。
由于活细胞的细胞膜具有选择透过性,所以可以阻拦台盼蓝,因而不被染色。
由于死细胞的细胞膜通透性较大,所以可被台盼蓝染成蓝色。
例题:
某兴趣小组在“探究培养液中酵母菌种群数量变化”的实验中,将酵母菌培养液稀释 100 倍后,经等体积台盼蓝染液染色后,用血细胞计数板(规格为 1 mm × 1 mm × 0.1 mm)进行计数,观察到中方格的菌体数如图。
若计数的中方格中酵母菌数量的平均数与图示方格内酵母菌数量相同,求培养液中酵母菌的密度。
解:
图中一个中方格 16 小格中有 12 个酵母菌,3 个被台盼蓝染色(即死细胞),可计数酵母菌为 9 个。
等体积染色相当于稀释倍率×2。题目强调平均数和图示相同。故培养液中酵母菌的密度为